猪肉中常见致病菌的多重直接PCR法的建立与应用

作者：宋雪; 赵格; 王娟; 黄秀梅; 盖文燕; 赵建梅; 曲志娜; 李月华; **波; 王君玮

来源：中国人兽共患病学报, 2017, 33(08): 710-715.

• 多重直接PCR
• 猪肉
• 食源性致病菌

目的建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法。方法根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,建立并优化多重直接PCR反应条件,检测引物的扩增特异性和灵敏性,并将所建立的方法应用于实际采集猪肉样本的检测,与金标培养法相比较,计算多重直接PCR检测法的敏感性、准确性以及阳性预测值。结果所设计的多重直接PCR引物对5种菌都有特异扩增,最低检出限量大肠杆菌为10CFU,金黄色葡萄球菌敏感性为100CFU,沙门氏菌、李斯特菌、小肠耶尔森氏菌敏感性可达1CFU。60份猪肉样本中检出大肠杆菌15份、沙门氏菌6份、金黄色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小肠耶尔森氏菌35份,阳性检出率均高于金标培养法,总体检测敏感性为100%,准确性为94%,阳性预测值为81.44%。结论多重直接PCR法实现了同时对各食源性致病菌敏感特异的检测,并且省去了提取模板的步骤,将检测时间缩短至3h左右,便于食品安全风险监测中常见食源性致病菌的通量检测。

• 单位
  中国动物卫生与流行病学中心; 农业部; 吉林农业大学; 生命科学学院