胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂对结直肠癌肿瘤干细胞分化的影响及对Hedgehog信号通路的调控作用

作者：徐纪中; 王贵宪^*; 袁维堂; 周全博; 胡晟云

来源：中华实验外科杂志, 2020, (02).

• 胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂
• 结直肠癌肿瘤干细胞
• 分化
• Hedgehog信号通路

目的 观察胶质瘤相关癌基因1特异性阻断剂(GANT-61)对结直肠癌肿瘤干细胞(CRC-CSCs)分化及对Hedgehog信号通路的调控作用的影响。方法 磁珠分选法获得CD133＋ CRC-CSCs,用含不同浓度(0、10、20、40 μmol/L)的GANT-61的干细胞培养液干预,设为对照组、低、中、高剂量组,测定干预不同时刻细胞活性、CRC-CSCs球形成率、CD133＋占比、核转录因子1(Gli1)、Hh受体蛋白(Ptch1)、c-Myc、细胞角蛋白20(CK20) mRNA和蛋白表达。多样本计量资料比较采用单因素方差分析,两两样本比较采用SNK-q检验。结果 与对照组比较,GANT-61各剂量组不同时刻CCK-8试验吸光度(A)值均降低(24 h：t＝2.445、4.985、6.903；48 h：t＝2.859、5.270、7.488；72 h：t＝3.324、8.053、12.042,P<0.05),且随GANT-61干预剂量升高而降低(F＝13.382、16.842、41.053,P<0.05),差异有统计学意义；对照组、低、中剂量组CCK-8试验A值随干预时间延长升高,且干预不同时刻CCK-8试验A值比较差异均有统计学意义(F＝44.598、31.844,P<0.05),而高剂量组随干预时间延长无明显变化(F＝1.585,P>0.05),差异无统计学意义。对照组、GANT-61低、中、高剂量组CRC-CSCs球形成率分别为(13.57±1.55)%、(11.22±1.01)%、(5.46±0.67)%、(1.60±0.30)%,CD133＋占比分别为(96.20±3.07)%、(81.34±5.84)%、(62.01±5.03)%、(45.38±4.21)%；与对照组比较,GANT-61各剂量组CRC-CSCs球形成率及CD133＋占比均降低(CRC-CSCs球形成率：t＝2.840、10.739、16.954,P<0.05；CD133＋占比：t＝5.036、12.974、21.809,P<0.05),且随GANT-61干预剂量升高而降低,各剂量组组间比较差异均有统计学意义(CRC-CSCs球形成率：F＝225.500,P<0.05；CD133＋占比：F＝62.988,P<0.05)。与对照组比较,GANT-61各剂量组Gli1、Ptch1、c-Myc、CK20 mRNA和蛋白相对表达量均降低(mRNA：低剂量组t＝2.577、2.659、2.524、4.031；中剂量组t＝5.271、5.587、6.163、6.500；高剂量组t＝7.442、8.976、8.750、9.632,P<0.05；蛋白：低剂量组t＝3.008、2.517、2.385、2.981；中剂量组t＝5.664、8.923、9.500、11.180；高剂量组t＝14.435、14.137、15.727、14.142,P<0.05),且随GANT-61干预剂量升高而降低(mRNA：F＝14.825、21.057、22.389、27.160,P<0.05；蛋白：F＝65.340、95.789、151.230、119.877,P<0.05),差异有统计学意义。结论 GANT-61可能通过下调Hedgehog信号通路基因Gli1、Ptch1、靶基因c-Myc、分化基因CK20 mRNA和蛋白的表达,从而起到抑制CRC-CSCs细胞自我更新能力、促进细胞分化作用。

• 单位
  郑州大学第一附属医院