TRIM44基因对子宫内膜癌细胞生长及放疗敏感性的影响

作者：王丽; 陆军; 刘金鹏; 万伟; 秦少磊; 张雅敏^*

来源：山西医科大学学报, 2022, 53(11): 1391-1401.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2022.11.007

• 子宫内膜癌
• 三结构域蛋白44
• 放疗敏感性
• DNA损伤修复
• p62
• 细丝蛋白A
• RAD51

目的 探究三结构域蛋白44(TRIM44)对子宫内膜癌(EC)细胞生长和放疗敏感性的调控机制。方法 (1)通过免疫组化检测30例EC患者的癌组织和临近癌旁组织中TRIM44的表达水平。通过qRT-PCR检测癌旁组织以及不同FIGO分期、不同组织学分级、淋巴结转移/未转移的EC患者癌组织中TRIM44 mRNA水平。(2)将人子宫内膜癌细胞系(HEC-1A)分为对照组、siRNA-NC组、siRNA-TRIM44组、LV-NC组和LV-TRIM44组，根据分组情况，使用Lipofectamine 2000试剂将阴性对照siRNA(siRNA-NC)、靶向TRIM44的siRNA(siRNA-TRIM44)、阴性对照慢病毒(LV-NC)和TRIM44过表达慢病毒(LV-TRIM44)转染到对应分组的HEC-1A细胞中，对照组细胞不进行转染，通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TRIM44的mRNA和蛋白表达水平。(3)将HEC-1A细胞分为siRNA-NC组、siRNA-TRIM44组、LV-NC组、LV-TRIM44组、8 Gy+siRNA-NC组、8 Gy+siRNA-TRIM44组、8 Gy+LV-NC组、8 Gy+LV-TRIM44组。根据分组情况，使用Lipofectamine 2000试剂转染细胞，并采用直线加速器6-MV X射线照射细胞(8 Gy)。通过CCK-8测定细胞增殖，AnnexinⅤ-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移和侵袭，qRT-PCR和Western blot检测TRIM44、p62、细丝蛋白A(FLNA)和RAD51的表达。结果 与癌旁组织相比，癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=8.906,P<0.001)。与FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期相比，Ⅲ+Ⅳ期癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=3.943,P<0.001)。与组织学分级G1级相比，G2+G3级癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=4.046,P<0.001)。与淋巴结未转移的患者相比，转移患者癌组织中TRIM44 mRNA表达水平显著升高(t=4.576,P<0.001)。与siRNA-NC组相比，siRNA-TRIM44组相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量均降低，而凋亡率升高(P<0.05)。与siRNA-NC组相比，siRNA-TRIM44组和8 Gy+siRNA-NC组细胞核P62蛋白相对表达量均升高，而细胞核FLNA和RAD51蛋白相对表达量均降低(P<0.05)。与8 Gy+siRNA-NC组相比，8 Gy+siRNA-TRIM44组细胞核P62蛋白相对表达量升高，而细胞核FLNA和RAD51蛋白相对表达量均降低(P<0.05)。结论 TRIM44的高表达促进了EC细胞的增殖和转移，TRIM44的高表达抑制了p62的核转位，从而无法降解细胞核内FLNA和RAD51,导致DNA修复增加、癌细胞活性和放疗抗性升高。