犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达

作者：王光川; 巴彩凤; 苏荣健; 张轶博; 赵微; 宋慧娟; 武洁

来源：安徽农业科学, 2008, (31): 13564-13567.

DOI：10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.31.038

• 犬
• 黑皮质素受体4
• 真核表达载体
• MDCK细胞

[目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。

• 单位
  锦州医科大学; 辽宁医学院附属第一医院