突变型脑红蛋白原核表达载体的构建与表达鉴定

作者：李伟光; 吴永红; 任长虹; 高艳; 张成岗

来源：军事医学, 2011, (01): 25-29.

• 脑红蛋白
• 神经保护
• 突变
• 原核表达
• 引物突变法
• 氨基酸类
• 聚合酶链反应
• 大肠杆菌
• 基因表达 neuroglobin
• neuroprotection
• mutation
• prokaryotic expression
• primer-directed site-specific mutagenesis
• amino acids
• polymerase chain reaction
• Escherichia coli
• gene expression

目的为了研究脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)发挥神经保护功能的作用机制,拟构建Ngb中关键氨基酸His突变的原核表达载体,并对其进行诱导表达与鉴定。方法利用引物突变法和PCR技术,扩增出突变型Ngb的cDNA,并克隆到原核表达载体pBV220,经测序鉴定正确转化到大肠杆菌HB101;对突变型Ngb蛋白进行诱导表达,产物经SDS-PAGE和Western印迹进行鉴定。结果与结论成功构建了pBV220-Ngb(H64V)和pBV220-Ngb(H96A)原核表达载体,SDS-PAGE和Western印迹检测结果显示突变型Ngb能够正常表达,为进一步揭示脑红蛋白神经保护功能与作用机制奠定了...

• 单位
  军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 蛋白质组学国家重点实验室