鉴别检测兔出血症病毒1型、2型双抗体夹心ELISA方法的建立及应用

作者：陈兴继; 魏后军; 范志宇; 胡波; 宋艳华; 陈萌萌; 仇汝龙; 葛雷; 王芳^*

来源：江苏农业科学, 2023, 51(24): 161-167.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2023.24.022

• 兔出血症病毒
• 双抗体夹心ELISA
• 单抗
• 鉴别检测

为实现对兔出血症病毒1型(RHDV1)和兔出血症病毒2型(RHDV2)的有效鉴别诊断，从而有效预防和控制兔出血症，将抗RHDV广谱单抗2A11作为捕获抗体包被于ELISA板，以HRP标记的抗RHDV1特异性单抗1D4、抗RHDV2特异性单抗6B3分别作为检测抗体，经条件优化，建立了鉴别检测兔出血症病毒1型、2型的双抗体夹心ELISA方法，并进行敏感性、特异性试验，对送检的60份兔肝脏样品用该双抗体夹心ELISA方法和RT-PCR方法进行检测，比较这2种方法的符合率。结果显示，该双抗体夹心ELISA方法的最佳工作条件为：捕获抗体浓度为4μg/mL,2种HRP标记的检测抗体的浓度均为0.5μg/mL;判定标准为：以检测抗体HRP-1D4检测样品D值>0.195判为RHDV1阳性，以检测抗体HRP-6B3检测样品D值>0.166判为RHDV2阳性；通过特异性和敏感性试验发现，该双抗体夹心ELISA方法具有较强特异性和较高敏感性。检测60份送检的兔肝脏样品，发现本方法与RT-PCR方法相比，检测RHDV1阳性样品的符合率为100%(9/9),RHDV2阳性样品的符合率为82.61%(19/23),阴性样品的符合率为87.5%(28/32),总符合率为93.33%(56/60),且该方法阳性样品检出率高于RT-PCR方法。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可有效地鉴别检测RHDV1和RHDV2这2种不同基因型的病毒，为兔出血症的流行病学研究提供有力的技术支撑。

• 单位
  塔里木大学; 江苏省农业科学院