重组狗凝血因子Ⅷ的慢病毒介导体外表达的研究

作者：孙海英; 程海; 李振宇; 杜冰; 曾令宇; 鹿群先; 何徐彭; 潘秀英; 徐开林

来源：中国实验血液学杂志, 2007, (04): 845-848.

• 慢病毒
• 狗凝血因子Ⅷ
• 血友病A
• 基因治疗

本研究的目的是制备携带狗凝血因子Ⅷ(cFⅧ)基因的慢病毒载体,探讨慢病毒载体能否介导cFⅧ在体外的有效表达。用构建携带cFⅧ基因的慢病毒载体pTK161(含PUB启动子)和pTK162(含2OH1启动子),同时构建含绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体pTK161′(含PUB启动子)和pTK162′(含2OH1启动子)的方法,分别与包装质粒ΔNRF、包膜蛋白质粒VSV-G共转染293T包装细胞,将包装好的病毒颗粒再感染293T细胞,检测病毒滴度和培养细胞上清中cFⅧ活性。结果显示:经限制性酶切鉴定,成功构建了pTK161、pTK162、pTK161′和pTK162′正向连接载体;pTK161′和pTK162′的病毒滴度分别为1.54×106U/ml和2.83×106U/ml;pTK161、pTK162感染靶细胞后24小时细胞上清中即可检测到cFⅧ的表达,72小时表达量达高峰。pTK162载体cFⅧ表达活性接近正常狗血浆FⅧ活性,而且明显高于pTK161(p<0.05),6周后cFⅧ表达活性仍达最高值的1/4。结论:构建的自身失活慢病毒载体可携带较大片段的cFⅧ基因,并在体外可获得有效表达;本研究为慢病毒载体介导的血友病A的基因治疗研究提供实验依据。

• 单位
  徐州医学院附属医院