AGEs对牙周膜成纤维细胞炎症因子、Cx43及血管生成的影响

作者：钟智红; 余何; 房莹; 朱金娟

来源：临床口腔医学杂志, 2023, 39(02): 77-82.

DOI：10.3969/j.issn.1003-1634.2023.02.004

• 晚期糖基化终产物
• 牙周膜成纤维细胞
• 炎症
• 缝隙连接蛋白43
• 血管生成

目的:研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products, AGEs)对人原代牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts, hPDLFs)炎症因子、缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)及血管生成的影响，明确AGEs参与牙周炎病程的机制。方法:组织块接种法培养hPDLFs并用波形蛋白鉴定；CCK8法检测AGEs对hPDLFs活力的影响并筛选合适浓度进行后续实验；细胞分为空白组、高糖培养基组、空白组+AGEs组(10μg/mL)、高糖培养基+AGEs组(10μg/mL),AGEs干预24 h;酶联免疫试剂盒(ELISA)检测各组上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)含量。免疫荧光或蛋白质印迹法检测hPDLFs晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation end products, RAGE)、Cx43、核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、血管内皮生长因子受体(receptor of vascular endothelial growth factor, VEGFR)蛋白表达量；检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)VEGF、VEGFR蛋白表达量。划痕实验、Transwell实验及小管形成实验检测各组条件培养基对HUVEC血管形成能力的影响。结果:组织块接种法能够培养hPDLFs, AGEs在10μg/mL时对hPDLFs活力无明显影响；与空白对照组相比，AGEs显著提高了hPDLFs中VEGF、IL-1β、TNF-α含量(P<0.05),RAGE、p-NF-κB蛋白表达量(P<0.05),降低了Cx43蛋白表达(P<0.05),其条件培养基显著提高HUVEC的血管形成能力(P<0.05),提高HUVEC中VEGF、VEGFR蛋白表达(P<0.05);与AGEs组相比，高糖+AGEs显著增强了AGEs促炎、促血管生成作用及对Cx43的抑制作用。结论:AGEs能够促进体外培养的hPDLFs细胞RGAE表达及炎症因子分泌，并间接促进血管形成，抑制Cx43表达；高糖环境能够增强AGEs的促炎、促血管生成作用及对Cx43的抑制作用。

• 单位
  武汉科技大学