人前列腺癌DU-145细胞中肿瘤干细胞的富集及鉴定

作者：吕殷婷; 焦举; 杨婷; 邹琼; 江淑琴; 张勇

来源：新医学, 2018, 49(06): 405-410.

DOI：10.3969/j.issn.0253-9802.2018.06.006

• 前列腺肿瘤干细胞
• 分化群44
• 无血清培养
• 富集
• 鉴定

目的从人前列腺癌DU-145细胞中富集具有干细胞特性的肿瘤细胞,并鉴定其肿瘤干细胞特性。方法利用流式细胞仪比较人前列腺癌LNCa P细胞、DU-145细胞中CD44+细胞所占比例;通过无血清连续传代培养,富集干性肿瘤细胞,计算不同时间点成球率;将无血清悬浮培养的肿瘤微球细胞,再次在含血清培养基中培养,验证肿瘤干细胞的分化特性;利用CCK-8增殖试验分别检测DU-145细胞和DU-145肿瘤微球细胞,比较两者增殖能力的差异;分别以DU-145肿瘤微球细胞、DU-145细胞为实验组和对照组制备荷瘤裸鼠模型,比较两者体内成瘤能力。结果流式细胞仪检测显示CD44+LNCa P、CD44+DU-145比例分别为0.4%、97.6%。无血清悬浮培养DU-145细胞第2日的成球率为(14.4±7.8)%,第7日的成球率为(34.2±8.7)%,第14日的成球率高达(61.4±7.6)%。悬浮成球DU-145细胞在加入含10%胎牛血清培养基24 h后,表现出和常规贴壁培养DU-145细胞相同形态。DU-145肿瘤微球细胞在铺板后24 h其增殖能力就可达到DU-145细胞的2倍左右,在第6日之后,DU-145肿瘤微球细胞存活率仍高于DU-145细胞,组间450 nm处吸光度比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。与DU-145细胞荷瘤裸鼠相比,DU-145肿瘤微球细胞荷瘤裸鼠的移植瘤体积较大、生长速度较快(P均<0.05)。结论无血清连续传代培养的DU-145细胞经富集分离可得到具有干细胞特征的前列腺肿瘤细胞,该方法简便易行,具有较理想的应用前景。

• 单位
  中山大学附属第三医院