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摘要
目的研究间充质干细胞(MSCs)来源小胞外囊泡(sEVs)对小鼠视网膜光损伤的作用及其可能的机制。方法人脐带来源MSCs采用流式细胞术鉴定表面标记蛋白, 收集第3～5代MSCs培养上清, 超速离心收集sEVs并采用透射电子显微镜鉴定形态。将65只清洁级8～10周龄健康雌性BALB/c小鼠按照随机数字表法随机分为正常组(17只)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(24只)和sEVs组(24只)。PBS组和sEVs组小鼠右眼玻璃体腔分别注射2 μl PBS和2 μl sEVs后, 在蓝光照度930 lx的环境下照射6 h;正常组小鼠不做处理。分组处理后3 d, 采用苏木精-伊红染色观察视网膜结构, 原位末端转移酶标记(TUNEL)染色进行凋亡细胞计数, 视网膜电图(ERG)检测小鼠视网膜功能, mRNA转录组测序技术检测PBS组与sEVs组小鼠视网膜mRNA表达差异情况, 并进行差异基因KEGG聚类分析, 实时荧光定量PCR法进一步验证差异基因表达。结果培养的MSCs中CD90、CD105表达阳性, 而CD34、CD45表达阴性, 提取的MSC-sEVs呈直径为80～140 nm的双层膜囊泡结构。苏木精-伊红染色结果显示, PBS组小鼠视网膜外核层细胞核排列紊乱, sEVs组视网膜结构紊乱程度轻于PBS组。sEVs组视网膜凋亡细胞计数为(14.60±4.04)个/视野, 少于PBS组的(24.00±8.52)个/视野, 差异有统计学意义(t=2.37, P<0.05)。sEVs组ERG a波振幅为(64.38±16.70)μV, 高于PBS组的(16.78±6.37)μV, 差异有统计学意义(P<0.05);PBS组和sEVs组b波振幅分别为(132.40±39.41)μV和(154.86±34.08)μV, 明显低于正常组的(338.38±27.41)μV, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。mRNA测序共发现差异表达基因110个, 其中sEVs组下调基因109个。KEGG聚类分析结果提示, 差异基因主要集中于炎症性疾病、免疫相关信号通路。PCR结果显示, sEVs组视网膜中趋化因子配体2、趋化因子受体2、白三烯B4、白细胞免疫球蛋白样受体A6和白细胞介素1β的mRNA相对表达水平低于PBS组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MSC-sEVs可以减轻蓝光造成的视网膜结构和功能损害, 这种保护作用可能是通过抑制炎症反应来实现的。
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