hITF毕赤酵母表达载体的构建及分泌表达

作者：孙勇; 彭曦; 张勇; 吕尚军; 汪仕良

来源：第三军医大学学报, 2006, (06): 527-530.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2006.06.013

• 人肠三叶因子
• 毕赤巴斯德酵母
• 分泌表达 human intestinal trefoil factor
• Pichia pastoris
• secreted expression

目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础。方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF。BspHⅠ线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeoc in筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因。阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tric ine SDS-PAGE分析及W estern b lot检测。结果经测序及PCR证实,hITFcDNA准确插入酵母表达载体pGAPZαA中,氯化锂转化后,重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中。Tric ine SDS-PAGE分析证明hIT...

• 单位
  创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室; 第三军医大学西南医院