肠出血性大肠杆菌Ⅲ型分泌系统ATP水解酶escN基因突变株的构建

作者：陈芳红; 李涛; 王慧

来源：生物技术通讯, 2015, 26(03): 346-348.

DOI：10.3969/j.issn.1009-0002.2015.03.010

• 肠出血性大肠杆菌O157∶H7
• Ⅲ型分泌系统
• Red重组系统

目的:利用λ噬菌体的Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7的Ⅲ型分泌系统ATP水解酶Esc N,构建大肠杆菌esc N基因缺失突变株。方法:以O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列,分别酶切连接于p UC19-kan质粒上,PCR获得中间嵌合卡那霉素抗性基因(带有FRT位点)的同源线性片段,利用质粒p KD46和p CP20介导的重组技术敲除esc N基因,并去除抗性标记;PCR及测序验证目的基因缺失后,测定缺失株及野生菌株的生长曲线。结果:敲除了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的esc N基因,突变株与野生株的生长曲线相近。结论:构建了Ⅲ型分泌系统缺陷菌株,为进一步研究Ⅲ型分泌系统因子在肠出血性大肠杆菌致病过程中的作用奠定了基础。

• 单位
  安徽医科大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院