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摘要
背景:神经元的体外原代培养在研究神经系统的发育、再生、信号转导机制、神经药理学以及基因表达方面具有极其重要的地位。目的:建立一种操作更加简单且能够得到较高纯度新生SD大鼠皮质神经元原代培养的方法。方法:取1 d新生SD大鼠皮质。传统方法实验组:取整个皮质;改良方法实验组:取SD大鼠表面2.0-3.0 mm处皮质。木瓜蛋白酶消化后离心,制备成单细胞悬液,以1×105/孔的浓度接种至含神经元培养液的24孔培养板进行原代培养。培养3 d时采用免疫细胞化学染色方法,使用神经元特异性标志物Tuj1与MAP-2双标记法鉴定所培养的细胞;采用倒置相差显微镜观察6,24,48,72 h及5,7 d细胞数和突起长度并记录。结果与结论:1所培养的细胞可表达神经元特异性标志物Tuj1与MAP-2,因此所培养细胞为神经元,可用于之后实验;2实验组培养至第3天时神经元的纯度已达到峰值92%,而普通实验组神经元的纯度为51%;32组细胞培养至6 h均已贴壁且长处小突起,培养至第3天时,细胞已初步形成神经网络,培养至5 d时神经网络密集;4研究所用方法简便能够稳定的培养出纯度较高的神经元,可以用于SD大鼠皮质源性神经元的相关实验研究。
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