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摘要
目的建立质粒表达载体转录介导的RNAi技术,为开发阻断表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路的新途径及其下游信号通路研究奠定基础。方法化学合成siRNA-EGFR序列,构建并鉴定重组载体pSciencer 2.0 U6-shRNA-EGFR,转染A549人肺腺癌细胞株,免疫印迹和RT-PCR检测沉默效果,用四甲基偶氮唑盐比色法、DAPI染色法、Annexin V/PI双标记法观察基因沉默后细胞生物学特性改变。结果shRNA-EGFR使EGFR表达明显下调,转染细胞后,显著抑制细胞增殖,诱发凋亡。DAPI染色示细胞核着色增强,胞核缩小,核膜皱缩,染色质凝聚、边缘化、破碎;Annexin V/PI示凋亡早期细胞比例增高;细胞周期分析见shRNA-EGFR各组G0~G1期细胞比例增加,S期比例减少。结论化学合成法和体内转录质粒载体法介导的RNAi可序列特异性下调A549细胞株EGFR基因转录和表达,抑制细胞增殖和诱发凋亡,部分逆转NSCLC细胞的恶性表型,有望成为NSCLC基因治疗和功能研究的工具。
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