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摘要
目的探讨神经干细胞(NSCs)转染脑源性神经生长因子(BDNF)后对β-淀粉样蛋白(Aβ)毒性作用的抵抗能力及机制。方法用脂质体介导法将BDNF基因转染到C57小鼠NSCs内,经荧光显微镜及ELISA检测转基因NSCs及其分化细胞基因表达情况。体外培养小鼠神经元,将其分成3组:a组为神经元组,b组为神经元与NSCs共培养组,c组为神经元与BDNF转基因NSCs共培养组;每组设2平行组。培养3d后,向其中一平行组加入Aβ40蛋白,作为d、e、f组。通过ELISA和Western blotting检验记录24 h和48 h后神经元生存率以及各组Aβ、总tau蛋白、磷酸化tau蛋白水平。结果 BDNF转基因干细胞及其子代细胞均有BDNF表达并持续1.5周左右。以a组细胞存活率为参照,24 h后d～f组细胞平均存活率分别是51.86%±0.03%、73.68%±0.04%、85.34%±0.01%;48 h后d～f组细胞平均存活率分别是38.76%±0.01%、59.65%±0.04%、75.61%±0.07%;其中d、e组细胞存活率明显低于其他各组,差异有统计意义(P<0.05)。a～c组Aβ蛋白未能检测到,d～f组Aβ蛋白水平较高,组间差异不具有统计学意义(P>.05)。各组细胞总tau蛋白水平差异不具有统计学意义(P>0.05)。各组磷酸化tau蛋白水平差异有统计学意义(P<0.05),其中d、e组磷酸化tau蛋白水平显著高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BDNF转基因NSCs可以持续表达BDNF基因产物,降低Aβ对神经元的毒性作用,同时通过减少细胞内磷酸化tau蛋白的水平提高细胞存活率。
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