Hmcn1对MC3T3-E1细胞体外成骨分化、迁移及增殖影响的实验研究

作者：周涛; 王佐林^*

来源：口腔颌面外科杂志, 2023, 33(02): 77-82.

• Hmcn1
• MC3T3-E1细胞
• 成骨分化
• 骨形态发生蛋白-2

目的：研究Hemicentin1(Hmcn1)基因对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（mouse embryo osteoblast precursorcells,MC3T3-E1 cells）成骨、迁移及增殖能力的影响。方法：体外培养MC3T3-E1细胞，对其进行成骨诱导，诱导后第0、3、7、14天时收样，通过实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）观察Hmcn1的表达量变化。使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染MC3T3-E1细胞，构建Hmcn1敲降的MC3T3-E1细胞，采用RT-qPCR检测敲降效率。采用RT-qPCR检测敲降前后骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、成骨细胞特异性转录因子（Osterix,OSX）、骨钙素（osteocalcin,OCN）、Runt相关转录因子2(Runtrelated transcription factor 2,Runx2)、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）表达水平的变化。通过ALP和茜素红S (alizarin redS,ARS)染色观察Hmcn1敲降对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。通过细胞划痕实验和Transwell实验观察Hmcn1敲降对MC3T3-E1细胞迁移能力的影响。通过细胞计数试剂盒-8(cellcountingkit-8,CCK8)实验观察Hmcn1敲降对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响。结果：对MC3T3-E1细胞进行体外成骨诱导后，Hmcn1基因的表达出现上调。使用siRNA敲降Hmcn1基因后，BMP-2表达下调。敲降Hmcn1后，MC3T3-E1细胞的迁移能力下降，增殖能力提高，ALP染色敲降组细胞着色较少。结论：Hmcn1基因可通过上调BMP-2的表达，促进MC3T3-E1细胞的迁移，抑制MC3T3-E1细胞的增殖，促进MC3T3-E1细胞体外成骨分化。

• 单位
  同济大学; 同济大学附属口腔医院