TDG蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备

作者：李石营; 兰燕; 唐波; 华子春

来源：东南大学学报(医学版), 2010, 29(05): 485-489.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6264.2010.05.002

• 胸腺嘧啶糖苷酶
• 原核表达
• 纯化
• 多克隆抗体 thymine DNA glycosylase
• prokaryotic expression
• purification
• polyclonal antibody

目的:表达纯化胸腺嘧啶糖苷酶(TDG)蛋白并制备TDG多克隆抗体。方法:PCR扩增小鼠TDG(mTDG)的基因片段并插入pET28a(+)原核表达载体,表达并纯化His-mTDG融合蛋白。用纯化的His-mTDG蛋白免疫兔子产生抗血清,进一步亲和纯化抗血清制备抗TDG的多克隆抗体,并检测分析制备的抗体在Western blotting和免疫荧光分析中的应用。结果:在低温(20℃)和低IPTG浓度(0.2 mmol.L-1)时,His-mTDG融合蛋白大部分在可溶上清部分,用亲和层析法分离纯化了His-mTDG蛋白,并用纯化的蛋白制备了兔抗TDG抗体,结果显示制备的抗体能够特异性地在免疫分析中使...

• 单位
  医药生物技术国家重点实验室; 南京大学