肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗中4-二甲氨基吡啶残留量高效液相色谱检测方法的建立及验证

作者：李双花; 赵萍^*; 田洪敏; 李红; 董威; 陈煜; 鲍路伟; 吴克

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(02): 211-216.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003824

• 肺炎球菌多糖
• 蛋白
• 结合疫苗
• 4-二甲氨基吡啶
• 高效液相色谱法

目的 建立肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗中4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,DMAP)含量检测的高效液相色谱(HPLC)法，并对该方法进行验证。方法 通过对色谱柱类型、流动相组成的优化建立检测肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗中DMAP残留量的HPLC法，对该方法进行专属性、准确度、重复性和重现性验证，并确定检出限、定量限及线性范围。用建立的方法检测13种不同血清型的肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗及1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟化硼(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化肺炎球菌多糖中间产物中DMAP残留量。结果 优化后的色谱条件：色谱柱为Sepax HP-C18(5μm,4.6 mm×250 mm)；流动相为5 mmol/L庚烷磺酸钠溶液(含20 mmol/L磷酸二氢钾，磷酸调pH至3.0)∶乙腈=87∶13(V/V)；检测波长为280 nm；流速为1 mL/min；进样体积为10μL；柱温为35℃。该方法不受供试品机制和前处理溶剂的干扰，专属性好；检出限和定量限分别为3.6和14.4 ng/mL，在0.05～10μg/mL范围内线性良好，R2=0.999 9；加标回收率为83%～105%，重复性RSD为0.28%～0.72%，重现性RSD为7.38%。13种不同血清型肺炎球菌多糖-CRM197蛋白结合疫苗中DMAP残留量为0.135～1.635μg/mL;CDAP活化肺炎球菌多糖第一步中间产物即可检测出DMAP，未检测到CDAP。结论 建立的HPLC法操作简便，专属性、准确度、重复性和重现性均较好，可作为肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗质量控制的有效检测方法。