H9N2亚型禽流感病毒NP蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

作者：梁世蕊; 吉艳红; **; 朱启运^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(10): 1216-1222.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0174

• 禽流感病毒
• H9N2亚型
• 核蛋白
• 纳米抗体
• 特性鉴定

以H9N2亚型禽流感病毒(AIV)为研究对象，将病毒灭活纯化后免疫羊驼，测得其血清抗体效价为1∶128 000；提取羊驼外周血淋巴细胞RNA，获得单个重链可变区(VHH)基因，成功构建H9N2亚型AIV的纳米抗体噬菌体展示文库，文库库容量为1.3×109cfu/mL，阳性率为100%；以H9N2亚型AIV-NP蛋白为靶向抗原，利用噬菌体展示技术进行筛选，获得3株靶向H9N2亚型AIV-NP蛋白的纳米抗体；构建纳米抗体真核表达重组质粒，表达纯化后收获3株纳米抗体；通过间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光试验对纳米抗体的亲和力、特异性等生物活性进行鉴定，最终得到1株广谱性高亲和力的H9N2亚型AIV-NP蛋白纳米抗体，可为检测方法的建立提供新的生物材料。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所