Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达及快速纯化

作者：何华华; 胡晓韵; 王婷; 喻婵^*

来源：湖北大学学报(自然科学版), 2019, 41(03): 223-227.

• Pfu DNA聚合酶
• Rosetta(DE3)
• 亲和层析
• PCR检测

来源于Pyrococcus furiosus COM1菌的Pfu DNA聚合酶具有保真性高、延伸速度快、热稳定性强等特点,能够提高PCR反应过程中的扩增效率,减少错误碱基掺入率.以大肠杆菌Rosetta(DE3)为重组细胞,利用一种快速表达纯化方法,让Pfu DNA聚合酶的表达纯化过程变得更加简便,并维持其高活性.结果表明,Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中能够进行大量表达,同时60℃高温水浴能有效去除杂蛋白,简化纯化步骤及提高Pfu DNA聚合酶纯度.经过一系列纯化步骤处理后,Pfu DNA聚合酶仍然能够保持较好的酶活,且在100μL PCR反应体系中,加入4μL的1 mg/mL Pfu DNA聚合酶液效果最佳.

• 单位
  湖北大学; 生命科学学院