EV71与CB3病毒VP1融合蛋白的构建表达与抗原性初步评价

作者：房华丽; 王琴; 罗森; 高翔; 屠伟; 田仁茂; 刘雄; 李涛; 王慧

来源：安徽医科大学学报, 2013, 48(06): 583-586.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2013.06.001

• 肠道病毒71型
• 柯萨奇B3病毒
• 外壳蛋白VP1
• 融合蛋白

目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法拼接构建重组融合蛋白基因(ecvp1),将该片段连接到pET-22b表达载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白,经Western blot鉴定其抗原性。结果pET-22b-ECVP1表达载体构建成功,融合蛋白相对分子量约为65 ku,Western blot分析表明,该融合蛋白能被抗EV71及抗CB3抗体特异识别。结论成功构建pET-22b-ECVP1表达质粒并诱导ECVP1融合蛋白表达,且融合蛋白具有良好的抗原性。

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 安徽医科大学; 军事医学科学院