6His-VP3融合蛋白的表达、纯化及其捕获细胞中相关蛋白的初步探讨

作者：王阿慧; 孙军; 毕昊; 彭冬君; 田俊; 狄勇; 宗义强; 屈伸

来源：医学分子生物学杂志, 2007, (02): 112-115.

DOI：10.3870/j.issn.1672-8009.2007.02.005

• 凋亡素
• VP3融合蛋白
• 相关蛋白
• 肿瘤特异性

目的研究人肝癌细胞HepG2与人胎肝细胞L-02中与VP3蛋白相互作用的蛋白组分,以探讨VP3特异性诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用PCR方法克隆vp3的DNA片段,将其插入质粒pET-28a(+)构建含6个组氨酸标签6His-VP3融合蛋白的原核表达载体。利用亲和层析技术制备纯化的6His-VP3融合蛋白作为诱饵,分别从肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02的总蛋白中,通过pull-down技术捕获与VP3相互作用的特异性蛋白质组分。结果获得了高纯度的6His-VP3融合蛋白;以其作为诱饵从HepG2细胞和L-02细胞中捕获到的与VP3作用的相关蛋白质组分存在差异。结论肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02中,与VP3作用蛋白的差异与其在不同细胞中的生物学行为相对应。

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 基础医学院