活性维生素D对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34的调控作用研究

作者：温影珍; 肖厚勤^*; 刘越存; 刘双信; 张鸿; 柯贵宝; 周燕梅; 张晓艺; 苏玉玲

来源：中国糖尿病杂志, 2019, 27(12): 909-916.

• 1α,25二羟维生素D3
• 足细胞
• 自噬
• Beclin-1
• 空泡分选蛋白34

目的探讨活性维生素D(VitD)对高糖诱导的足细胞自噬相关蛋白Beclin-1和空泡分选蛋白34(Vps34)的调控作用。方法 (1)体外培养永生化小鼠足细胞,用高糖30 mmol/L培养0、3、6、12、24、36、48 h后,采用Western blot检测微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1和Vps34的蛋白表达,激光共聚焦观察足细胞骨架蛋白Synatopodin、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达变化;(2)1α,25二羟维生素D3[1α,25(OH)2D3](1、10、100 nmol/L)和高糖(HG,30 mmol/L)培养足细胞48 h,激光共聚焦观察Synatopodin、LC3-Ⅱ的表达变化,透射电镜下观察足细胞内自噬体的形成,Western blot及RT-qPCR半定量检测LC3-Ⅱ、Beclin-1和Vps34的蛋白和mRNA表达;(3)加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,10 mmol/L)作用48 h后,Western blot检测LC3-Ⅱ、Beclin-1和Vps34的蛋白表达。结果足细胞经高糖处理后LC3-Ⅱ表达增强,Beclin-1和Vps34的蛋白和mRNA水平也逐渐升高,24 h达高峰,随后表达逐渐降低(P<0. 05)。与高糖组相比,高糖+1α,25(OH)2D3(HG+VitD)组Beclin-1、Vps34蛋白和mRNA的表达呈浓度依赖性上调,抑制高糖长时刺激导致的自噬活性下降(P<0. 05);与HG+VitD组相比,HG+VitD+3-MA组足细胞Beclin-1、Vps34蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0. 05)。结论足细胞在高糖刺激下早期自噬活性增强,长期刺激自噬抑制;1α,25(OH)2D3可能是一种自噬活化剂,通过调控自噬相关蛋白Beclin-1、Vps34水平,促进自噬溶酶体形成,改善高糖诱导的足细胞损伤。

• 单位
  广东省人民医院; 东莞市第五人民医院