激活转录因子-2调控小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20分子机制的初步研究

作者：王文江; 冯琦; 袁杰; 高玉光

来源：蚌埠医学院学报, 2014, 39(11): 1460-1463.

DOI：10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2014.11.002

• 激活转录因子-2
• 基因克隆
• 载体构建
• 小鼠

目的:通过克隆激活转录因子-2(ATF-2)基因以及真核表达载体的构建,初步研究ATF-2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的影响。方法:根据引物设计原则设计ATF-2基因逆转录-聚合酶链反应(PCR)引物,从小鼠成釉细胞中提取总RNA逆转录所得c DNA为模板,进行PCR法扩增。得出含有HindⅢ和xhol酶切位点的ATF-2目的基因连接到pc DNA 3.1/myc-His A真核表达载体上;用重组质粒转染小鼠MMP-20基因,观察其对MMP-20基因转录活性的影响。结果:经过PCR引物扩增得到1 463 bp基因片段,将获得的重组质粒pc DNA 3.1/myc-His A-ATF-2双酶切分析鉴定,测序结果与Gen Bank登录基因序列完全一致;双荧光素酶结果显示ATF-2可以促进MMP-20启动子的表达(P<0.01),且在-825+23(848 bp)启动子区段促进作用最明显。结论:成功实现了ATF-2基因克隆及真核表达载体的构建,并发现ATF-2对MMP-20启动子区域活性表达起正向调节作用。

• 单位
  平凉市人民医院; 滨州医学院附属医院; 蚌埠市第一人民医院