沉默信息调节因子1对胆管癌细胞生物学特性的作用

作者：廖婉玉; 张斌; 方诚; 杨燕; 张舒; 丁希伟; 邹晓平

来源：中华消化杂志, 2015, 35(08): 542-548.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-1432.2015.08.009

• 胆管上皮癌
• 沉默信息调节因子-1
• RNA干扰
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 细胞运动

目的了解沉默信息调节因子1(SIRT1)在胆管癌细胞中的表达水平,探讨其对胆管癌细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR和Western印迹法比较人胆管癌细胞QBC939和HuCCT1与正常胆管上皮细胞HIBEpiC中SIRT1 mRNA和蛋白的表达。将QBC939和HuCCT1分成阴性对照组、转染序列1组和转染序列2组,分别转染阴性对照小干扰RNA、针对SIRT1的小干扰RNA序列1和小干扰RNA序列2,采用实时定量PCR和Western印迹法鉴定干扰效果。转染后应用细胞计数试剂盒和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。采用Western印迹法检测凋亡相关蛋白生存素、B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax)基因、剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP),以及上皮标志物上皮型钙黏蛋白和间质标志物神经型钙黏蛋白、波形蛋白的表达情况。统计学处理采用t检验。结果胆管癌细胞QBC939和HuCCT1中SIRT1的mRNA表达水平分别比正常胆管上皮细胞HIBEpiC升高(3.30±0.43)和(4.55±0.50)倍,差异均有统计学意义(t=7.29、9.79,P均<0.05);胆管癌细胞中SIRTl的蛋白表达水平升高与mRNA相似。转染SIRTl小干扰RNA后,胆管癌细胞中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著降低。HuCCT1细胞的转染序列1组和转染序列2组的细胞生存率在转染后72 h分别为(19.72±1.39)%和(27.48±2.67)%,均低于阴性对照组的(84.65±3.18)%,差异均有统计学意义(t=37.42、27.54,P均<0.05);HuCCT1细胞中转染序列1组和转染序列2组早期凋亡细胞比例分别为(19.43±1.72)%和(19.80±0.86)%,均高于阴性对照组的(5.43±0.31)%,差异均有统计学意义(t=11.30、22.23,P均<0.05);HuCCT1细胞中转染序列1组和转染序列2组24 h穿过微孔膜的细胞数分别为(56.00±2.61)和(58.80±3.19)个,均少于阴性对照组的(76.60±5.08)个,差异均有统计学意义(t=7.21、5.93,P均<0.05)。QBC939细胞的细胞生存率、早期细胞凋亡比例和迁移能力与HuCCT1细胞相似。下调胆管癌细胞中SIRT1的表达后,可显著下调生存素、神经型钙黏蛋白和波形蛋白的表达,上调Bax、剪切型PARP和上皮型钙黏蛋白的表达。结论 SIRT1在胆管癌细胞中高表达,下调胆管癌细胞中SIRT1的表达可抑制细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,机制可能与下调生存素,上调Bax蛋白的表达,抑制上皮间质转化的发生有关。

• 单位
  徐州市中心医院; 南京大学医学院附属鼓楼医院