利用CRISPR/Cas9技术构建猪的LDLR基因敲除细胞

作者：韩佃刚; 胡娟; 董俊; 周思佳; 陈朝林; 张家翔; 信吉阁^*

来源：湖南农业大学学报(自然科学版), 2023, 49(04): 468-471.

DOI：10.13331/j.cnki.jhau.2023.04.014

• 猪
• 低密度脂蛋白受体基因
• 基因敲除
• CRISPR/Cas9系统

利用CRISPR/Cas9系统构建猪的低密度脂蛋白受体基因LDLR敲除细胞：根据NCBI数据库猪LDLR基因(Gene ID为396801)序列设计sg RNA靶位点，构建敲除打靶载体，通过电转染猪胎儿成纤维细胞，经G418筛选获得细胞克隆，进行PCR扩增和T载体克隆测序，经序列比对计算基因敲除效率。结果表明，依照CRISPR/Cas9系统GN20GG法则，在LDLR基因第一外显子上设计1条sg RNA，测序结果显示靶序列已正确连接，转染、筛选后共获得30个单细胞克隆，23个测序成功，其中有7个细胞克隆为LDLR基因敲除细胞克隆，敲除效率为30.4%。

• 单位
  云南农业大学