人lncRNA-GACAT2过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

作者：倪娜; 董洪亮; 高海洋; 陈微微; 孟新宇; 崔冰洁; 杜静^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2023, 49(05): 1147-1153.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20230506

• 肺肿瘤
• 长链非编码RNA
• GACAT2基因
• 细胞增殖
• 细胞干性

目的：探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌相关转录本2 (GACAT2)基因对肺癌A549和H1299细胞增殖和干性的影响，阐明lncRNA GACAT2基因在肺癌发生发展中的作用。方法：实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法扩增lncRNAGACAT2基因的全长序列，克隆至pc3.1 （+）真核表达载体，采用菌液PCR法和基因测序法检测GACAT2过表达载体的构建情况。将pc3.1-GACAT2过表达质粒和对照质粒pc3.1分别转入人肺癌A549和H1299细胞，采用G418筛选并建立稳定过表达GACAT2的A549和H1299细胞，分为空载体组（转染pc3.1空载体）和pc3.1-GACAT2组（转染pc3.1-GACAT2重组质粒）。采用RT-qPCR法检测2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平，CCK-8法检测2组细胞增殖活性，细胞克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数，干细胞成球实验观察2组细胞成球数。结果：成功构建GACAT2真核过表达载体。与空载体组比较，pc3.1-GACAT2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01），细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01），细胞克隆形成数明显降低（P<0.05或P<0.01），细胞成球数明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：过表达人lncRNA GACAT2基因能抑制肺癌A549和H1299细胞的增殖能力和细胞干性。

• 单位
  滨州医学院附属医院