区分禽流感病毒亚型诊断基因芯片的构建

作者：杨忠苹; 王秀荣; 石霖; 田丽娜; 王煜; 陶启蒙; 陈化兰

来源：中国动物检疫, 2008, (10): 29-32.

• 禽流感
• 基因芯片
• 亚型鉴别 influenza
• Diagnostic microarray
• Subtyping

制备了可同时区分AIVH5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。试验以重组质粒为模板,进行PCR扩增,然后用异丙醇沉淀法进行纯化,制备探针及内参基因。将探针及内参基因用点样缓冲液稀释到0.3μg/μL后用芯片点样仪将其点制到醛基化基片上,样点中心间距450μm,样点直径220μm。将点好的基片在室温干燥24h以上,后经65℃再水合10s、80℃干燥、65mj紫外线交联照射25min后,再用封闭液封闭,95℃变性处理,成功构建了能区分禽流感血凝素H5,H7,H9亚型及神经氨酸酶N1,N2亚型的检测基因芯片。在PCR扩增中标记待检样品,对制备的检测芯片进行质量检验,结果表...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 重庆出入境检验检疫局