RNA干扰技术沉默生长因子结合蛋白2相耦联的接头蛋白1基因抑制血管生成

作者：Lu Wei; Wu Jiawen; Wang Lihua; Cheng Guobing

来源：中华实验外科杂志, 2015, 32(07): 1606-1608.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2015.07.036

• RNA干扰
• 生长因子结合蛋白2相耦联的接头蛋白1基因
• 血管生成

目的探讨应用RNA干扰(RNAi)技术沉默生长因子结合蛋白2相耦联的接头蛋白1(Gab1)基因, 使其在体外抑制血管生成。方法观察人主动脉血管内皮细胞株(EA.hy926)的生长及形态;构建靶向Gab1的小干扰RNA(siRNA-Gab1)表达慢病毒转染EA.hy926细胞;通过Western blot和反转录-聚合酶连反应(RT-PCR)分别检测Gab1蛋白及Gab1 mRNA的表达水平, 采用表面培养法构建体外血管生成三维培养模型, 观察转染后EA.hy926细胞体外形成血管样结构的数目和长度。结果与空白组及阴性对照组比较, siRNA-Gab1干扰组EA.hy926细胞形态变化明显, 由长梭形逐渐变成星形或多角形;siRNA-Gab1干扰组Gab1蛋白及Gab1 m RNA(0.291± 0.004)的表达水平明显降低, 差异有统计学意义(P< 0.05);siRNA-Gab1干扰组三维培养模型中血管样结构的数量(15.600±2.608)个和长度(2.896 00±0.736 97)mm均明显减少;其差异有统计学意义(P<0.05)。而阴性和空白对照组之间比较, 细胞形态均呈梭形, Gab1蛋白及Gab1 mRNA(1.001 ±0.050、1.063±0.040)的表达水平、三维培养模型中血管样结构的数量(35.800±2.775)、(38.200 ±2.588)个和长度(6.300 0±0.912 8)、(6.466±1.252 9)mm差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论 siRNA-Gab1能够抑制EA.hy926细胞中Gab1的mRNA及其蛋白的表达, 从而在体外抑制血管生成。

• 单位
  浙江大学