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摘要
目的应用基因工程技术制备中耳炎肺炎球菌疫苗新型载体——肺炎球菌溶血素(pneumolysin,Pn)。方法根据报道的Pn基因序列,设计一对各带有一个限制性内切酶位点的引物,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术从肺炎球菌基因组DNA中扩增出Pn基因,对该基因片段进行酶切、回收后克隆入表达载体pET-28a,并转化至大肠杆菌JM109(DE3)宿主细胞中。在培养基中加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导Pn基因的表达,用超声波破菌后,经固化镍树脂亲和吸附和纯化在羧基端带有6个组氨酸的重组Pn蛋白。结果通过常规克隆方法和PCR技术,成功构建Pn基因,DNA测序证实基因构建正确,表达产物相对分子质量约52 000,表达量约占总菌体蛋白的8％。结论利用基因工程技术可以克隆Pn基因,并获得该基因在宿主菌中的表达。采用固化镍树脂亲和纯化技术制备出重组Pn蛋白,为进一步研制肺炎球菌多糖和其自身蛋白结合的新型中耳炎疫苗提供参考。
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