检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立和初步应用

作者：陈杨; 孟林春; 郭梦娇; 张成成; 薄宗义; 楚电峰; 曹永忠; 吴艳涛; 张小荣^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 1-18.

• 鸡毒支原体
• VlhA蛋白
• 抗体检测
• 间接ELISA

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）抗体的间接ELISA方法，结合HI试验，为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白（rVlhA）作为包被抗原，使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1:500血清稀释度处S/P值的回归方程lg（抗体滴度）=1.257×lg（1∶500处S/P值）＋3.709，R~(2)=0.9176，S/P临界值为0.32，临界滴度是1 200。经验证，rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性，最低能检出 1∶2 000 稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测，IDEXX-MG方法作为对照，借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致；rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示本研究建立的rVlhA-ELISA方法和HI试验具有较好的临床应用价值，可以初步应用于MG感染的临床大规模、快速筛查并对结果进行复核。

• 单位
  扬州大学