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摘要
目的 建立一种简单易行的高纯度原代皮质神经元长期培养方法。方法 取胎龄为16～18 d的SD胎鼠，分离皮质并剪碎，经胰酶消化、吹打、计数后，接种于PDL包被的培养板上，6 h后换为维持培养基进行培养，每5 d半量换液，培养至第7,14和21 d时，采用NSE和GFAP荧光染色鉴定神经元纯度。实验过程中主要摸索了以下几个条件：胰酶溶液、细胞接种密度、维持培养基和胶质细胞增殖抑制剂添加时间。结果 优化后的神经元培养条件为：使用含EDTA的0.0625%胰蛋白酶进行消化；以40000 cm-2密度接种；以Neurobasal Plus培养基作为维持培养基；培养至第6小时到第5天时，给予10μmol·L-15-氟尿嘧啶和尿嘧啶。采用上述条件培养的神经元可以达到在体外健康生长至3周以上，纯度>90%。结论 本文以SD胎鼠皮质为样本建立了简便的高质量神经元长期培养方法。
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