MCF10A-Er-Src诱导转化模型的构建

作者：任雪; 程谟斌; 张业; 沈珝琲

来源：医学研究杂志, 2014, 43(10): 29-32.

• 人乳腺表皮细胞
• 雌激素受体配体结合结构域-Src融合蛋白
• 他莫西芬
• 细胞转化

目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒。包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系。利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化。结果构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白。TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化。结论成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 北京协和医学院; 中国医学科学院基础医学研究所