具有LXRα活性效应物质的新型筛查方法研究

作者：汤卓衡; 高俊敏; 贾映亭; 胡文欣; 胡建英^*

来源：中国环境科学, 2020, 40(07): 3156-3164.

DOI：10.19674/j.cnki.issn1000-6923.2020.0352

• 肝X受体
• 重组蛋白
• 有机磷酸酯
• 酵母双杂交系统

为了检测环境中潜在的LXRα效应物质.本研究以LXRα蛋白为例,利用核受体蛋白与小分子亲和结合的原理,构建了pCold-TF-LXRα重组蛋白并优化了重组蛋白的表达条件,建立了特异性捕获活性物质的方法.结果表明:诱导温度为20℃、诱导剂IPTG浓度为0.4mmol/L为重组蛋白的最佳表达条件;同时,利用LXRα激动剂T0901317 4个梯度浓度(0.25,2.5,25,250μg/L)的加标回收率实验测得线性回归曲线为y=0.83604x+0.40763,R2=0.9948,证明方法具有有效性;对比pCold-TF空载体蛋白(6.42%)和重组蛋白(79.83%)对T0901317(250μg/L)的回收率,说明方法具有特异性.为了验证方法的实用性,将重组蛋白与15种典型的有机磷酸酯类化合物(OPEs)的混合标样进行"捕获"实验,证明了TPHP、BPADP、TCrP、EHDPP、TNBP、RDP、TEHP、TDCIPP具有LXRα的活性效应.最后,用酵母双杂交实验验证了这8种OPEs均为LXRα的拮抗剂.

• 单位
  重庆大学; 北京大学; 三峡库区生态环境教育部重点实验室