积雪草酸对原代大鼠视网膜神经节细胞低氧损伤的保护作用研究

作者：胡方园; 黄婉静; 吴继红; 陈君毅^*

来源：中国眼耳鼻喉科杂志, 2018, 18(04): 240-244.

DOI：10.14166/j.issn.1671-2420.2018.04.007

• 大鼠原代视网膜神经节细胞
• 积雪草酸
• c-Abl
• 神经保护

目的研究积雪草酸(AA)在体外大鼠视网膜神经节细胞(RGC)低氧损伤中的保护作用,并探讨其作用机制。方法选取出生13 d的新生SD大鼠,解剖游离出视网膜,利用Thy1.1抗体包被法纯化获取RGC,定量聚合酶链反应(q PCR)鉴定RGC的纯度。体外给予原代RGC不同时长(0、12、24、48 h)的低氧(1%O2)损伤刺激,TUNEL检测RGC的凋亡情况。预先给予原代RGC不同浓度(0、5、10、20、50μmol/L)的AA干预后,再以1%O2培养48 h,通过TUNEL凋亡检测、CCK-8细胞增殖检测研究AA在RGC凋亡中的作用。利用Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统对凋亡相关蛋白c-Abl进行检测。结果低氧条件下(1%O2),RGC的TUNEL凋亡阳性细胞数随着低氧刺激时间的递增呈梯度增加。低氧环境下(1%O2),给予不同浓度的AA干预,TUNEL结果显示10μmol/L和20μmol/L AA处理后,RGC凋亡细胞数显著减少(P值均<0.01)。同时CCK-8结果显示10μmol/L和20μmol/L AA干预后,RGC的增殖活力明显升高(分别为P<0.05,P<0.01)。Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统结果表明,AA在原代RGC低氧损伤中可以明显抑制c-Abl的磷酸化水平。结论体外低氧刺激时,AA可以减少RGC的凋亡,对原代RGC的低氧损伤有一定的保护作用,其作用机制与抑制c-Abl的磷酸化激活相关。

• 单位
  复旦大学附属眼耳鼻喉科医院