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摘要
目的 揭示miR-26a-5p对β-淀粉样蛋白诱导的炎症及氧化应激损伤的作用机制。方法选取2018-01—2020-01江苏省人民医院老年科实验室70例阿尔茨海默病（AD）患者外周血样本，同时采集80例健康体检者外周血作对照，通过qRT-PCR检测miR-26a-5p在AD患者体内的表达情况，并采用ELISA分析AD患者和健康体检者中炎性因子和活性氧（ROS）水平。通过Aβ1-42(10μmol/L)刺激BV2小胶质细胞构建AD细胞模型，以等体积的DMSO刺激BV2细胞为对照组。采用ELISA检测正常BV2细胞和AD细胞模型的炎性和ROS水平，并通过qRT-PCR检测AD细胞模型中miR-26a-5p的表达趋势。转染miR-26a-5p调控质粒，采用CCK-8和ELISA分析检测miR-26a-5p对BV2细胞增殖、炎性因子表达和氧化应激的影响，生物信息分析和双荧光素酶报告基因预测miR-26a-5p的作用靶点并检测其对靶分子的影响，qRT-PCR、CCK-8和ELISA分析检测KCNJ2对BV2细胞增殖、炎性因子和氧化应激的影响，通过共同调控miR-26a-5ps和KCNJ2的表达，检测PI3K/AKT通路活性、细胞活力和ROS水平变化。结果 miR-26a-5p在AD患者血清中的表达量低于健康患者，AD患者血清内炎性因子TNF-α和IL-18水平高于健康体检者，ROS水平也高于健康体检者。通过Aβ1-42刺激构建的AD细胞模型中，TNF-α、IL-18和ROS水平高于正常BV2细胞，miR-26a-5p的表达量在AD细胞模型中低于正常BV2细胞。过表达miR-26a-5p促进AD细胞增殖，降低TNF-α、IL-18和ROS水平；干扰miR-26a-5p表达抑制AD细胞增殖，TNF-α、IL-18和ROS水平升高。生物信息学分析显示miR-26a-5p可靶向KCNJ2;KCNJ2在AD模型中高表达，过表达KCNJ2可抑制AD细胞增殖，提高TNF-α、IL-18和ROS的水平，干扰KCNJ2的表达可提高AD细胞增殖能力并降低TNF-α、IL-18和ROS水平；激活miR-26a-5p的表达可通过靶向降低KCNJ2的表达进而刺激PI3K/AKT通路活性来提高BV2细胞增殖减缓ROS释放水平。结论 miR-26a-5p可通过靶向KCNJ2调节PI3K/AKT信号通路影响BV2细胞增殖、炎性反应和氧化应激。
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单位南京医科大学第二附属医院
