高压尾静脉注射和位点特异性整合介导的人凝血因子Ⅸ基因治疗血友病B小鼠

作者：张磊; 顾东生; 杜伟廷; 刘鹏霞; 卢士红; 杨仁池

来源：中华血液学杂志, 2010, (05): 294-299.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2010.05.003

• 位点特异性整合
• 基因治疗
• 血友病B
• 小鼠 Site-specific integration
• Gene therapy
• Hemophilia B
• Mouse

目的通过高压尾静脉注射将携带attB和人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)的质粒与表达phiC31的质粒共同导入血友病B小鼠肝脏细胞,检测目的质粒能否整合入小鼠基因组并持续表达。方法①构建表达hFⅨ并携带attB核心序列的真核表达载体attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP,并在体外验证该载体能否表达目的基因。②用高压尾静脉注射法将该载体与表达phiC31的质粒CMV-int共注入血友病B小鼠,attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP单独注射为对照。③ELISA的方法检测hFⅨ在其体内的表达;用出血时间评价血友病小鼠出血症状是否改善;用巢式PCR检测attB-hFⅨ-pIRES2-EGFP是否整合到基因组的...

• 单位
  实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院; 北京协和医学院