大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立与初步应用

作者：孙思萌; 侯美佳; 冯启峥; 石博; 刘嘉利; 师东方^*

来源：中国预防兽医学报, 2020, 42(01): 46-51.

• 大肠杆菌
• 菌毛基因
• 多重PCR
• 检测

为建立一种可以同时扩增大肠杆菌(E. coli)F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因保守序列的多重PCR检测方法,本研究设计合成5对分别针对F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的特异性引物,以具有相应菌毛基因的E. coli参考菌株DNA为模板,通过对多重PCR反应条件的优化,建立了检测F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的多重PCR方法。所建立的多重PCR方法能够特异性扩增F4、F5、F6、F41、F18菌毛基因的目的片段,大小分别为770 bp、533 bp、422 bp、643 bp和1 140 bp,该方法对沙门氏菌、猪丹毒杆菌、巴氏杆菌以及无菌毛基因的E. coli等参考菌株均无特异性扩增片段,检出F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的最低活菌浓度分别为5.3×105cfu/mL、3.7×106cfu/mL、3.1×105cfu/mL、3.7×107cfu/mL、6.9×105cfu/mL。用不同批次的引物和试剂进行3次多重PCR检测均能扩增出目的条带,表明建立的多重PCR方法有很好的批内和批间重复性。对90株大肠杆菌临床分离菌株菌毛基因进行检测,F4阳性率为3.33%,F5阳性率为2.22%,未检测到F6、F41和F18阳性菌株,其检测结果与常规单一PCR的检测结果一致。研究表明:建立的E. coli菌毛基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性和重复性,可用于E. coli分离菌株菌毛基因型的快速鉴定,同时提高了检测效率。

• 单位
  东北农业大学