山羊不同组织实时荧光定量PCR内参基因的筛选

作者：徐颂为; 黄忍; 杨璐; 向华^*; 张焕容^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2021, (24): 31-145.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.02.0220

• 山羊
• 内参基因
• 实时荧光定量PCR
• geNorm软件
• 稳定性

为了筛选出在山羊组织中能稳定表达的内参基因,试验采集1月龄简州大耳羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、皮肤、肌肉、淋巴结和唇10个组织样品,选取甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)、组蛋白3.3(H3-histone family 3A, H3F3A)、beta-肌动蛋白(actin-beta, ACTB)和肽基脯氨酰异构酶(peptidylprolyl isomerase, PPIA)4个基因做为候选内参基因,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测上述10个组织样品的中4个候选内参基因的表达情况,利用geNorm软件分析4个候选基因的定量数据,筛选出在山羊组织中表达稳定的内参基因。结果表明:成功克隆GAPDH、H3F3A、ACTB和PPIA 4个内参基因,4个内参基因的RT-qPCR扩增曲线正常,无引物二聚体和非特异性条带产生,PCR产物单一,绘制的标准曲线上各点在同一条直线上。4个内参基因的稳定度排序为H3F3A>PPIA>ACTB>GAPDH,相对表达量依次为PPIA>H3F3A>ACTB>GAPDH。说明PPIA和H3F3A基因表达水平较高,稳定性较好,可作为后续研究山羊组织中功能基因表达量的最佳内参基因。

• 单位
  西南民族大学