NaV1.5钠通道C末端IQ基序的重组质粒构建及蛋白制备

作者：张峰慧; 薛迎春; 许兴荣; 邵冬雪; 张晨阳; 刘岩; 苏敬阳; 胡慧媛^*; 郝丽英

来源：中国医科大学学报, 2021, 50(08): 694-698.

DOI：10.12007/j.issn.0258-4646.2021.08.005

• NaV1.5钠通道
• IQ基序
• 重组质粒
• pull down实验

目的构建NaV1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定。方法将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Sepharos 4B分离纯化后采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量,pull-down方法检测GST-IQ融合蛋白的生物学活性。结果构建的IQ重组质粒经限制性内切酶和基因测序双重鉴定显示质粒构建成功,融合蛋白经纯化后其浓度和纯度均较高,并具有能够与CSL蛋白浓度依赖性结合的生物学活性。结论本研究成功构建了可以表达生物活性蛋白的NaV1.5钠通道IQ基序原核表达载体,为深入探讨NaV1.5钠通道的生物学功能奠定了重要的物质基础。

• 单位
  中国医科大学