用改进的重叠区扩增基因拼接法构建中间缺失突变体

作者：李成华; 房海燕; 邓小云; 夏昆; 郑多; 夏家辉

来源：中华医学遗传学杂志, 2004, 21(01): 56-59.

DOI：10.3760/j.issn:1003-9406.2004.01.013

• 重叠区扩增基因拼接法
• 中间缺失突变体
• 克隆

目的　构建缺失第 32 5～ 373位氨基酸密码子的磷脂酸磷酸化激酶β(phosphatidylinositol 4 - kinase beta,PI4 K-β)基因 ,以探索一种简便的构建中间缺失突变体的方法。　方法　应用重叠区扩增基因拼接法的原理 ,在拼接延伸后 ,再进行一次 PCR扩增 ,得到缺失第 32 5～ 373位氨基酸密码子的 PI4 K- β基因 ,克隆至 p CMV- Tag4 A真核表达载体。　结果　成功地构建出缺失第 32 5～ 373位氨基酸密码子的 PI4 K- β突变体。　结论　这种改进的重叠区扩增基因拼接法可以有效而可靠地构建中间缺失突变体 ,具有推广价值。

• 单位
  医学遗传学国家重点实验室; 中南大学