hTFPI-2的基因克隆表达及生物学性质研究

作者：孔德升; 郭泓珅; 蔡旭; 梁旺; 彭卓醇; 宋后燕; 马端

来源：中华血液学杂志, 2006, (09): 606-610.

DOI：10.3760/j:issn:0253-2727.2006.09.008

• 组织因子途径抑制物-2
• 蛋白质复性
• 基因工程

目的克隆人组织因子途径抑制物-2(human tissue fact0r pathway inhibitor-2,hTFPI-2)的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得有活性的目的蛋白。方法应用 RT-PCR 法从人胎盘总 RNA 中获得人组织因子途径抑制物-2的编码基因,将该基因片段克隆至原核表达载体 pET19b 中,转化表达宿主 BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达。获得的包涵体经离子交换法进行纯化,并使其在体外进行复性。采用发色底物法测定 hTFPI-2对纤溶酶、胰蛋白酶的抑制作用;明胶酶谱法测定对基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)的抑制作用;采用人工基底膜法观察hTFP1-2对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响。结果成功获得了序列完全正确 hTFPI-2的编码基因,hTFP1-2在大肠杆菌中以包涵体的形式获得高效表达,占细菌总蛋白的20%～30%。经纯化、复性后可得到纯度大于90%的目的蛋白。复性后的 hTFPI-2具有抑制胰蛋白酶、纤溶酶、MMP-2和 MMP-9的活性,同时亦具有抑制纤维肉瘤细胞 HT-1080侵袭转移的能力结论采用原核表达系统高效地获得了具有活性的 hTFPI-2。

• 单位
  复旦大学