发夹结构RNA表达载体特异性抑制结肠癌LoVo细胞绿色荧光蛋白基因表达

作者：马晋平; 汪建平; 詹文华; 彭俊生; 高劲松; 朱孝峰; 殷勤伟

来源：中华实验外科杂志, 2004, (07): 25-27+130.

DOI：10.3760/j.issn:1001-9030.2004.07.008

• RNA干扰
• 绿色荧光蛋白
• 结直肠肿瘤

目的构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA表达载体(SHipU6GFP),观察SHipU6GFP对结肠癌LoVo细胞的GFP特异性抑制作用。方法设计合成针对绿色荧光蛋白GFP基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHipU6GFP质粒。采用报告基因质粒pCXGFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6(3.3kb)质粒,应用LipofectamineTM2000将pCXGFP质粒和SHipU6GFP质粒转染K562细胞和LoVo细胞。荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率。结果质粒pU6和SHipU6GFP经EcoRⅤ和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3.3kb和约300bp条带,而后者出现3.3kb和约350bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHipU6GFP质粒。K562细胞和LoVo细胞中分别观察到转染pCXEGFP质粒和SHipU6GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少。结论结肠癌LoVo细胞存在RNA干扰现象,可以进行相关RNA干扰抑制实验。

• 单位
  中山大学肿瘤防治中心; 中山大学; 中山大学附属第一医院