内蒙古绒山羊Wnt10b干扰载体的构建及鉴定

作者：吴子贤; 吴静; 王荣; 周健; 王瑞雪; 刘俊阳; 刘佳森; 赵艳红^*

来源：中国畜牧杂志, 2021, 57(05): 203-206.

DOI：10.19556/j.0258-7033.20200306-04

• 内蒙古绒山羊
• 耳皮肤细胞
• 细胞增殖
• Wnt10b
• 质粒构建
• 脂质体转染
• qRT-PCR

本研究旨在利用内蒙古绒山羊Wnt10b基因构建干扰质粒并转染耳皮肤细胞检测基因表达。以1岁龄内蒙古绒山羊为研究对象,扩增Wnt10b基因CDS序列,连接到pSGU6载体,构成pSGU6-Wnt10b重组质粒,并使用感受态细胞大量扩增提取,所得质粒转染至生长状态良好的内蒙古绒山羊耳皮肤细胞中,提取RNA利用Real Time PCR技术检测细胞中Wnt10b基因表达情况。结果显示:pSGU6-Wnt10b干扰载体经测序鉴定证明构建成功,转染至耳皮肤细胞24 h后出现绿色荧光,并在48 h后荧光强度最高,转染效率达到最大,实验组中Wnt10b mRNA表达量显著低于对照组。

• 单位
  动物科学学院; 内蒙古自治区农牧业科学院; 内蒙古农业大学