兔视黄醇结合蛋白4基因的克隆及原核表达

作者：王泽祥; 孙宏勇; 郭东春; 单丽玲; 原冬伟; 刘家森; 曲连东

来源：动物医学进展, 2013, (07): 53-56.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2013.07.023

• 兔视黄醇结合蛋白4
• 原核表达
• 肝细胞 rabbit retinol binding protein4
• prokaryotic expression
• hepatocyte

为表达兔视黄醇结合蛋白4(rRBP4),提取兔肝脏组织总RNA,采用RT-PCR技术扩增了rRBP4的基因,大小为606bp。将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)获得表达重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21(DE3)Plyss中进行表达,pET-32a-rRBP4以包涵体形式表达,包涵体经过洗涤、变性后,用镍离子亲和层析柱纯化,并利用尿素梯度透析法复性。SDS-PAGE分析表明,获得与预期分子质量一致的特异性目的蛋白;Western blot检测表明,重组蛋白与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所