鸭东方次睾吸虫病间接ELISA诊断方法的建立

作者：高俊峰; 毛瑞锋; 孙云异; 马晓晓; 兰卓; 常巧呈; 王春仁^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(08): 947-954.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0132

• 东方次睾吸虫
• 间接ELISA
• 烯醇化酶
• 血清学诊断

为评价候选蛋白烯醇化酶(Enolase)作为东方次睾吸虫ELISA诊断抗原的潜力,重组表达东方次睾吸虫烯醇化酶基因,以纯化好的重组蛋白为抗原,优化各检测条件,建立了鸭东方次睾吸虫病间接ELISA诊断方法并用该方法检测临床样品。结果显示,通过棋盘滴定法,确定了抗原的最佳包被质量浓度为2g/mL和血清最佳稀释度为1∶100,其他条件优化结果为:酶标二抗的最佳稀释度为1∶5000,最佳包被条件为4℃包被过夜,最佳封闭条件为50g/L脱脂奶粉溶液封闭2h,显色液最佳显色时间为10min。通过对25份未感染东方次睾吸虫鸭的阴性血清进行检测与统计分析,确定出该重组蛋白间接ELISA方法的阳性临界值为0.322。经优化反应条件后建立的间接ELISA方法具有特异性强、敏感性高和重复性好等优点。利用本研究中建立的ELISA方法检测120份临床血清,阳性率为14.2%,与粪便虫卵检测结果的符合率为94.74%,表明该烯醇化酶可作为东方次睾吸虫病血清学诊断的良好候选抗原。本研究为进一步研发鸭东方次睾吸虫病的血清学诊断试剂盒奠定了坚实的理论基础。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 动物科技学院