慢病毒介导的GFP转染对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、细胞表型及脑脊液诱导后分化能力的影响

作者：陈娟; 李福军; 方堃; 李松洋; 叶英^*

来源：现代生物医学进展, 2021, 21(19): 3617-3627.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2021.19.004

• 骨髓间充质干细胞
• 慢病毒
• 绿色荧光蛋白
• 脑脊液

目的:研究慢病毒(Lentivirus)介导的绿色荧光蛋白(Lentivirus-GFP)转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的可行性及稳定性,以及对人脑脊液诱导转染后BMSCs(BMSCs-GFP)成神经分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法培养BMSCs,Lentivirus-GFP以5、10、30、50的感染复数(MOI)转染BMSCs,96h后倒置显微镜下观察GFP转染效率和表达情况,筛选最适MOI;流式细胞术检测细胞表型;CCK8法检测细胞活力。人脑脊液诱导BMSCs-GFP向神经细胞分化,蛋白印迹法检测神经细胞表面标记物MAP-2和Nestin表达。结果:全骨髓贴壁法分离培养的BMSCs生长旺盛。MOI值为5、10、30、50的转染效率分别为56.2%、87.3%、94.7%和95.1%,当MOI为30时,Lentivirus-GFP转染BMSCs效率较高,且对BMSCs生长状态无显著性影响。BMSCs-GFP表达CD29、CD90,较少表达CD45、CD54,符合干细胞特性。BMSCs-GFP增殖活性与未转染GFP基因的BMSCs相比,差异无统计学意义(P>0.05)。人脑脊液诱导BMSCs-GFP成神经细胞分化后表达神经元标记物MAP-2和Nestin。结论:Lentivirus-GFP能高效稳定转染大鼠BMSCs(最适MOI值为30),同时不影响其生物学特性,人脑脊液能诱导BMSCs-GFP成神经细胞分化。

• 单位
  徐州医科大学