体外诱导自噬对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

作者：高灵素; 张晓慧; 张宏; 张蕴玉; 陈露; 傅晋翔

来源：中华血液学杂志, 2012, 33(11): 932-937.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2012.11.010

• 多发性骨髓瘤
• 雷帕霉素
• 3-甲基腺嘌呤
• 自噬
• 细胞凋亡

目的 探讨诱导自噬对多发性骨髓瘤(MM)细胞株增殖的影响.方法 在无血清培养条件下诱导MM细胞株U266细胞自噬并分别加入雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤(3-MA),观察其细胞增殖,以正常培养条件培养U266细胞、淋巴瘤细胞株Jurkat及无血清培养Jurkat为对照组.采用CCK8法检测细胞的增殖；用流式细胞术检测细胞凋亡；单丹(磺)酰戊二胺(MDC)法检测细胞自噬泡数量；RT-PCR法检测自噬基因mtor、Beclinl表达；Western blot方法分析自噬标志蛋白-微管相关蛋白轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3 Ⅰ/Ⅱ)及溶酶体相关膜蛋白1(LAMP 1)含量的变化.结果 正常培养条件下U266细胞有基础水平的自噬,无血清培养可诱导U266细胞上调自噬水平；雷帕霉素促进无血清培养条件下U266细胞自噬并刺激其增殖能力,至培养96 h无血清培养及雷帕霉素处理U266细胞内自噬水平下降；3-MA具有上调U266细胞自噬和促进增殖作用,但仅维持24 h；正常培养条件下雷帕霉素及3-MA可显著抑制U266细胞增殖；无血清培养24 h后细胞凋亡率[(17.90±1.46)％]高于正常培养细胞[(1.33±0.09)％](P＜0.01)；加入雷帕霉素及3-MA可使血清饥饿诱导的细胞凋亡率分别降至(6.23±0.12)％和(6.97±0.03)％(P＜0.01)；培养至72 h,各处理组细胞凋亡率趋于一致[(30.37±0.27)％、(30.13±1.93)％和(28.57±2.83)％](P＞0.05)；去除雷帕霉素及3-MA后U266细胞凋亡率减低至18.7％和12.6％.结论 MM细胞内存在高于淋巴瘤Jurkat细胞株基础水平的自噬；在常规培养条件下雷帕霉素及3-MA均可下调MM细胞增殖水平；血清饥饿条件下U266细胞可通过上调自噬水平维持生存和增殖；雷帕霉素诱导血清饥饿条件下U266细胞自噬,但是具有自限性；3-MA对U266细胞自噬具有双重作用.

• 单位
  苏州大学附属第二医院