新疆双峰驼C3d基因cDNA的克隆与序列分析

作者：娜斯拜·阿卜杜瓦哈普; 高晓娟; 坤杜孜阿依·阿布都沙拉木; 李江伟^*

来源：新疆农业科学, 2023, 60(02): 493-500.

• 骆驼C3d
• PCR
• 基因克隆
• 序列分析
• 结构预测

【目的】克隆骆驼补体C3d基因，分析序列特征，为其佐剂效应研究提供依据。【方法】利用Trizol试剂，从骆驼肝脏组织提取总RNA,并反转录获得cDNA。设计C3d特异引物，应用PCR技术扩增C3d序列，构建到pMD18-T载体。将重组质粒转入感受态菌株并双酶切鉴定。使用ClustW,DNAstar, Swiss-Model软件对构建的重组C3d基因序列进行同源性比对，建立系统进化树并对其二级和三级结构进行预测和分析。【结果】采用骆驼C3d特异引物，PCR扩增获得大小为909 bp的骆驼补体C3d基因。构建至T载体并转入大肠杆菌，获得阳性转化克隆。克隆的新疆双峰驼C3d序列与骆驼科C3d基因之间的同源性在97%以上，与牛和猪C3d基因同源性为88%,与兔和人的C3d基因同源性为83%。对骆驼C3d蛋白采用Swiss-Model软件进行序列分析，预测该蛋白质的二级结构主要由α-螺旋和β-折叠组成，该蛋白可能具有良好的免疫原性和免疫结合活性。【结论】C3d基因在进化中较为保守，在骆驼免疫中可以采用亲缘关系较近的其他动物来源的C3d作为分子佐剂从而增强骆驼免疫效果。