荧光素酶表达载体yy630的构建及鉴定

作者：李玉洁; 山本義治; 曹后男; 金美玉; 赵成日^*

来源：分子植物育种, 2022, 20(02): 479-485.

DOI：10.13271/j.mpb.020.000479

• 荧光素酶
• yy630载体
• 构建

使用Promega公司pNL1.1[Nluc]载体的Nluc’基因替换yy621载体中的LUC+基因，构建yy630载体。通过PCR扩增的方法从pNL1.1[Nluc]载体中得到带有BglⅡ和XbaⅠ限制性酶切位点的Nluc’基因片段，经BglⅡ和XbaⅠ消化后的片段插入到载体yy621的BglⅡ和XbaⅠ酶切位点之间，替换原有的LUC+基因。Nluc’基因是通过ATGGCTATGGCT序列替换pNL1.1[Nluc]载体Nluc基因的起始密码子ATG而形成的。经菌落筛选、PCR鉴定和测序验证，阳性菌落中的Nluc’基因序列与载体pNL1.1[Nluc]中的Nluc基因序列完全一致，载体630构建成功。本研究通过比较分析并筛选出适合植物体研究的荧光素酶载体对于研究植物基因调控机理有着重要的意义。

• 单位
  延边大学